二氧化碳培養(yǎng)箱正確使用方法及日常維護(hù)保養(yǎng)

二氧化碳培養(yǎng)箱為細(xì)胞生長(zhǎng)提供了理想的生長(zhǎng)環(huán)境，細(xì)胞在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)數(shù)月甚至數(shù)年，如果培養(yǎng)不當(dāng)導(dǎo)致細(xì)胞死亡可能造成的科研成果損失。培養(yǎng)箱本身性能的穩(wěn)定和可靠性固然重要，另外，正確的使用方法和日常保養(yǎng)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果也是至關(guān)重要。

今天為大家介紹減少實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞污染的三種途徑：

1.正確的使用培訓(xùn)；

2.持續(xù)的日常保養(yǎng)；

3.適當(dāng)?shù)臄[放位置。

正確的使用培訓(xùn)

實(shí)驗(yàn)室內(nèi)往往眾多實(shí)驗(yàn)人員共用一臺(tái)培養(yǎng)箱，難免有人為操作失誤，都會(huì)增大交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)，因此應(yīng)對(duì)所有實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行培養(yǎng)箱的使用培訓(xùn)。需要注意以下幾點(diǎn)：

設(shè)備使用培訓(xùn)

使用培養(yǎng)箱前必須著個(gè)人防護(hù)裝備，按照實(shí)驗(yàn)室生物安全等級(jí)要求實(shí)施實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范、無(wú)菌操作方法、標(biāo)準(zhǔn)操作流程（SOP）。

實(shí)驗(yàn)服袖口需扎進(jìn)手套內(nèi)（如圖A），未扎進(jìn)的袖口可能接觸到潔凈的培養(yǎng)基，會(huì)增加交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)（如圖B），另外裸露皮膚上的可能潛在的污染源也會(huì)增加交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)（如圖C）；

手套使用前用70%常用消毒劑消毒；

培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)盤、培養(yǎng)皿等在放入培養(yǎng)箱前需做好標(biāo)記；

從箱子后部依次往前擺放培養(yǎng)基，以免早放置的被過(guò)多干擾。

近期需要取出的材料放至靠近箱門處并做好標(biāo)記；

帶蓋的長(zhǎng)頸瓶應(yīng)遠(yuǎn)離箱門以避免交叉污染；

避免堆疊太多培養(yǎng)基；

避免干擾細(xì)胞生長(zhǎng)盡量少開箱門。

人員操作培訓(xùn)

建立完善的實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范；

新進(jìn)實(shí)驗(yàn)員應(yīng)建立培訓(xùn)流程；

實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)定期或不間斷進(jìn)行操作培訓(xùn)；

做好詳盡的文件記錄，文件記錄不僅單純的記錄實(shí)驗(yàn)室事件，對(duì)設(shè)備定期維護(hù)、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)查找都能起到很好的提示和記錄，比如提示每周檢查過(guò)濾器、記錄開門頻率對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。

持續(xù)的日常維護(hù)保養(yǎng)

培養(yǎng)箱日常維護(hù)保養(yǎng)對(duì)其性能的保障非常重要，甚至比操作技術(shù)失誤對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響更大。做好培養(yǎng)箱的日常維護(hù)不僅減少對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響更能延長(zhǎng)培養(yǎng)箱的使用壽命，降低實(shí)驗(yàn)室成本。

完善的文件管理

廠商提供的操作維護(hù)說(shuō)明書是很好的參考文件，會(huì)列舉日常使用及保養(yǎng)需注意的要點(diǎn)，可以作為實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)箱維護(hù)文件的參考。制定維護(hù)保養(yǎng)文件時(shí)需全面考慮培養(yǎng)箱使用頻率、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境潔凈度、使用人員的數(shù)量、以及培養(yǎng)細(xì)胞的類型等，綜合各方面情況列出合理的方案。

箱體的定期清潔

培養(yǎng)箱內(nèi)外部的定期清潔頻率取決于培養(yǎng)細(xì)胞的類型和實(shí)驗(yàn)室環(huán)境。

外部清潔必須定期去除灰塵及附著在表面的污染物，這些污染物在開門時(shí)很可能隨空氣流動(dòng)潛入箱體內(nèi)。培養(yǎng)量大的實(shí)驗(yàn)室建議每周清潔一次，培養(yǎng)量小的實(shí)驗(yàn)室建議每月清潔一次。使用較溫和的家用清潔劑或蒸餾水清潔即可。

不銹鋼內(nèi)膽建議每月清潔一到兩次，圓角的設(shè)計(jì)（圖D）可以減少污染物的產(chǎn)生，可使用70%異丙醇、酒精或其它無(wú)腐蝕性的消毒劑擦拭，切記不可使用鹵素類消毒劑（次氯酸、漂白粉）。門口墊圈處（圖E）很易滋生污染物，需注意加強(qiáng)清潔，或拆下進(jìn)行高溫滅菌。

水盤的清潔

水盤的清潔和換水是培養(yǎng)箱日常維護(hù)很重要的項(xiàng)目，至少一周需清潔一次，頻繁加水以保障飽和濕度。水盤加水使用蒸餾水或去離子水，可以加少劑量的硫酸銅溶液抑制污染物。

防止干燥

如果培養(yǎng)環(huán)境濕度不足，培養(yǎng)基中的水分會(huì)蒸發(fā)造成環(huán)境干燥影響細(xì)胞生長(zhǎng)。至少每周加一次水對(duì)保持培養(yǎng)箱濕度非常重要。

污染風(fēng)險(xiǎn)降到

細(xì)菌、霉菌、病毒或支原體污染是細(xì)胞生長(zhǎng)大的威脅。現(xiàn)代的培養(yǎng)箱的設(shè)計(jì)和特點(diǎn)可以適當(dāng)減少污染發(fā)生。

HEPA過(guò)濾器

閉環(huán)HEPA過(guò)濾器是減少污染發(fā)生的一個(gè)重要設(shè)計(jì)。HEPA過(guò)濾器持續(xù)提供箱內(nèi)潔凈的空氣。但為保證HEPA過(guò)濾的有效性，HEPA需要定期更換，每周或每?jī)芍軕?yīng)定期檢查過(guò)濾器。進(jìn)氣過(guò)濾器（圖F）的壽命一般在3-6個(gè)月。NuAire建議供氣過(guò)濾器（圖G）每使用5瓶氣或已變黃時(shí)更換一次，大的囊性過(guò)濾器（圖H）每?jī)赡晷韪鼡Q一次。

配備HEPA過(guò)濾器的培養(yǎng)箱類似一個(gè)微型潔凈間，箱內(nèi)持續(xù)過(guò)濾的空氣使箱體空氣潔凈度達(dá)到百級(jí)。每一次開箱門都可能造成污染物的侵襲，NuAire培養(yǎng)箱每20分鐘換氣一次，使污染物快速被過(guò)濾，箱體內(nèi)空氣潔凈度達(dá)ISO5級(jí)。

循環(huán)滅菌

一些實(shí)驗(yàn)室潛在病原微生物如HIV病毒，需要145℃干熱循環(huán)滅菌才能有效滅殺。145℃滅菌程序需要持續(xù)8-14小時(shí)，可選擇在夜間運(yùn)行。NuAire培養(yǎng)箱*的層架和內(nèi)部五金件耐受145℃滅菌，無(wú)需滅菌前取出，節(jié)約了滅菌時(shí)間。

145℃滅菌需要按照實(shí)驗(yàn)室SOP根據(jù)實(shí)際需要運(yùn)行，并且不能代替日常的清潔保養(yǎng)。

放置適當(dāng)位置

培養(yǎng)箱需要放置在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)合適的位置：需遠(yuǎn)離走廊，環(huán)境溫度需穩(wěn)定，遠(yuǎn)離水源，遠(yuǎn)離通氣設(shè)備以免空氣污染，遠(yuǎn)離窗口避免陽(yáng)光直射，遠(yuǎn)離其它熱源如高壓蒸汽滅菌器，以及離電源近的位置。